动物处死术

一、目的

通过本实习掌握小鼠、大鼠、豚鼠、兔、狗、猫的安死术的处死方法。在处死动物的过程中，尽量减轻动物的痛苦。

二、仪器与材料

小鼠、大鼠、注射器、手术刀、密闭广口瓶或塑料袋、乙醚、氯化钾、硫喷妥钠、CO₂高压瓶。

三、实验方法

安乐死是动物实验中常用来处死实验动物的一种手段，这是从人道主义和动物保护角度，在不影响实验结果的同时，尽快让动物无痛苦死去的方法。实验动物安乐死，有的是因为中断实验而淘汰动物的需要，有的是因为实验结束后做进一步检查的需要，有的是因为保护健康动物而处理患病动物的需要。实验动物安乐死常用的方法有：颈椎脱臼法、空气栓塞法、放血法、断头法、药物法等。选择哪种安乐死方法，要根据动物的品种(系)、实验目的、对脏器和组织细胞各阶段生理生化反应有无影响来确定。确保时间短，无痛苦。一般遵循以下原则：①尽量减少动物的痛苦，尽量避免动物产生惊恐、挣扎、喊叫。②注意实验人员安全，特别是在使用挥发性麻醉剂(乙醚、安氟醚、三氟乙烷)时，一定要远离火源。③方法容易操作。④不能影响动物实验的结果。⑤尽可能地缩短致死时间，即安乐死开始到动物意识消失的时间。⑥判定动物是否被安乐死，不仅要看呼吸是否停止，而且要看神经反射、肌肉松弛等状况。

（一）颈椎脱臼法

颈椎脱臼法就是将动物的颈椎脱臼，使脊髓与脑髓断开，致使动物无痛苦死亡。由于颈椎脱臼法既能使动物很快丧失意识，减少痛苦，又容易操作。同时，破坏脊髓后，动物内脏未受损坏，脏器可以用来取样。所以该方法被认为是一种很好的动物安乐死方法。颈椎脱臼法最常用于小鼠、大鼠，也用于沙鼠、豚鼠、兔。

1、小鼠颈椎脱臼的方法  首先将小鼠放在饲养盒盖上，一只手抓住鼠尾，稍用力向后拉，另一只手的拇指和食指迅速用力往下按住其头部，或用手术剪刀或镊子快速压住小鼠的颈部，两只手同时用力，使之颈椎脱臼，从而造成脊髓与脑髓断离，小鼠就会立即死亡。

2、大鼠颈椎脱臼的方法  基本上与小鼠的方法相同，但是需要较大的力，并且要抓住大鼠尾的根部(尾中部以下皮肤易拉脱，不好用力)，最好旋转用力拉。

3、沙鼠颈椎脱臼的方法  基本上与大鼠的方法相同，但由于沙鼠善于跳跃，在按其头部的时候，速度尽量快些。

4、豚鼠的颈椎脱臼方法  先用左手以稳准的手法迅速扣住其背部，抓住其肩胛上方，用手指紧握住颈部，然后用右手紧握住其两条后腿，旋转用力拉。

5、兔的颈椎脱臼的方法  对于lkg以下的仔兔，操作时，将右手除拇指以外的四指放在耳后，左手紧紧握住兔的后腿，用右手握住头颈交接部，使其身体方向与头部方向呈垂直，用力向前拉，兔很快就会死亡。对于lkg以上的兔，也可采用颈椎脱臼的方法，但是需要两个人来操作，一人用两手于耳后抓紧其头部，另一人用两手紧紧握住其后腿，然后同时旋转用力拉。

（二）空气栓塞法

空气栓塞法是将一定量的空气，由静脉推入动物循环系统内，使其发生栓塞而死。当空气注入静脉后，可在右心随着心脏的跳动使空气与血液相混致血液呈泡沫状，随血液循环到全身各处。空气进入肺动脉可阻塞其分支，进入心脏冠状动脉可造成冠状动脉阻塞，发生严重的血液循环障碍，动物很快死亡。空气栓塞法主要用于较大动物的安乐死，如兔、猫、犬等。操作时用注射器将空气急速注入静脉。一般兔、猫需要注入空气l0ml-20ml，犬需要注射70ml-150ml。

（三）放血法

所谓放血法就是一次性放出动物大量的血液，致使动物死亡的方法。由于采取此法，动物十分安静，痛苦少，同时对脏器无损伤，对活杀采集病理切片也很有利。因此，放血法是安乐死时常选用的方法之一。放血法常用于小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猫、犬等。小鼠、大鼠可采用摘眼球大量放血致死。豚鼠、兔、猫可一次采取大量心脏血液致死。犬可采取颈动脉、股动脉放血。具体操作如下：①犬的颈动脉放血。在麻醉状态下，暴露出犬的颈动脉，在两端用止血钳夹住，插入套管，然后放松心脏侧的钳子，轻轻压迫胸部，大量放血致死。②犬股动脉放血。在麻醉状态下，暴露出三角区，用利刀在三角区作一个约l0cm的横切口，将股动脉全部切断，立即喷出血液，用一块湿纱布不断擦去股动脉切口处的血液和凝块，同时不断用自来水冲洗流血，使股动脉保持通畅，犬就会在5分钟内死亡。

（四）断头法

断头法是指用剪刀在动物颈部将其头剪掉，大量失血而死亡。断头法看起来残酷，但因是一瞬间的经过，动物的痛苦时间不长，并且脏器含血量少，便于采样检查，所以也被列为安乐死方法的一种。断头法适用于小鼠、大鼠、沙鼠等动物。具体操作：①小鼠、沙鼠的断头方法：用左手拇指和食指夹住小鼠或沙鼠的肩胛部，固定，右手持剪刀垂直剪去其头部。②大鼠的断头方法：操作者戴上棉纱手套，用右手握住大鼠头部，左手握住背部，露出颈部，助手用剪刀在鼠颈部将鼠头剪掉。

（五）药物法

1、药物吸入

药物吸入是将有毒气体或挥发性麻醉剂，被动物经呼吸道吸入体内而致死。药物吸入法也是安乐死常用方法，适用小鼠、大鼠、沙鼠、豚鼠等小动物。药物吸入常用的气体、麻醉剂有：CO₂、CO、乙醚、氯仿等，因挥发性麻醉剂前有所述，现以CO₂为例介绍。

操作时，准备5倍笼盒大小的透明塑料袋或专用容器，将装动物的笼盒放入透明塑料袋内，把塑料袋包紧、封好，并且将输送CO₂用的胶管末端放入塑料袋内。塑料袋内充满气体后，动物很快就会被麻醉而倒下，继续充气15秒，然后将胶管拔出，封好袋口，放置一段时间后确定动物是否死亡。放CO₂气体时，不宜过快，过快会冻结，致死效果就会减弱。使用固体CO₂时，将凝固块放入塑料袋内，使CO₂气体蒸发，动物吸入后立即死亡。

由于CO₂的比重是空气的1.5倍，不燃，无气味，对操作者很安全，动物吸入后没有兴奋期即死亡，处死动物效果确切，所以对各种小动物特别适用。一般使用市售液体CO₂高压瓶或者固体CO₂。

2、药物注射

将药物通过注射的方式注入动物体内，使动物致死。药物注射法常用于较大的动物，如豚鼠、兔、猫、犬等。药物注射常用的药物有氯化钾、巴比妥类麻醉剂、DDT等。

⑴氯化钾  多用于兔、犬，采取静脉注射的方式，使动物心肌失去收缩能力，心脏急性扩张，致心脏弛缓性停跳而死亡。每只成年兔由耳缘静脉注入10％氯化钾溶液5ml-10ml；每条成年犬由前肢或后肢下静脉注入10％氯化钾溶液20ml-30ml，即可致死。

⑵巴比妥类麻醉剂  多用于兔、豚鼠，一般使用苯妥英钠，也可使用硫喷妥钠、戊巴比妥等麻醉剂。用药量为深麻醉剂量的25倍左右。豚鼠常用静脉和心脏内给药，也可腹腔内给药，一般90mg／kg的剂量，约15分钟内死亡。

⑶ DDT  多用于豚鼠、兔、犬。豚鼠皮下注射0.9g／kg体重。兔皮下注射0.25g／kg体重，静脉注射43mg／kg体重。犬静脉注射67mg／kg体重。